时间：2015-12-20 17:35:06 所属分类：医学检验 浏览量:
近年来我们在制作石蜡切片的过程中,不断总结经验教训,分别在组织固定、脱水、透明、浸蜡等关键环节上采取了大量改进措施,制作了一些优质的石蜡教学切片,从而提高了切片质量。现将改进方法介绍如下。 1、材料与方法 1.1材料 固定液、药棉、纱布、组织块、10%
近年来我们在制作石蜡切片的过程中,不断总结经验教训,分别在组织固定、脱水、透明、浸蜡等关键环节上采取了大量改进措施,制作了一些优质的石蜡教学切片,从而提高了切片质量。现将改进方法介绍如下。
1、材料与方法
1.1材料
固定液、药棉、纱布、组织块、10%乙醇、氯仿、温度计、蜡箱。
1.2 方法
1.2.1固定方法的改进
在盛有固定液的瓶底上垫上药棉或几层纱布。容易切成小块的新鲜组取材后马上投入固定液,不易切成小块的柔软组织采用重新固定法处理,将取下较大的组织或器官先投入固定液,2~3h后组织基本硬化,再修成小块投入新配的固定液中。
1.2.2脱水过程的改进
在梯度乙醇脱水时,把常规30%乙醇改为更低浓度10%乙醇开始逐步升级,使组织块中的水分逐渐被乙醇替代;在放入梯度乙醇时,要将组织块放到滤纸上来回的反转一下,以尽量少带水到高浓度乙醇,放入无水乙醇之前,用吹风机的弱风将组织块吹干;组织在无水乙醇的脱水时间不要超过2h;将少许硫酸铜放入无水乙醇内若变蓝色,表明无水乙醇内已有水分,需及时更换新液,确保组织彻底脱水。
1.2.3透明步骤的改进
组织学切片制作常用的透明剂是氯仿。常规方法将在梯度乙醇脱水后的组织直接转入氯仿,把脱水后组织转入氯仿3份、无水乙醇1份的混合液中1h后,再转入氯仿Ⅰ、Ⅱ液中透明;组织放入氯仿时要用纱布包裹浸入透明剂,并将载玻片压在其上面,使组织完全浸入透明剂内。
1.2.4浸蜡过程的改进
浸蜡在软蜡箱与硬蜡箱中进行,常规方法在蜡箱上部放1个温度计,我们分别在2个蜡箱的中部及底部各放1个温度计,显示其确切温度。先把组织块放在两个软石蜡和氯仿等量混合液浸1~2h后,再移入1个硬石蜡内浸1h,在软蜡箱内可延长0.5~1h,而浸硬蜡的时间不要超过1h。
2、结果
经以上改进方法制作的蜡块较易切成连续切片且蜡带不散裂,镜下的组织结构清晰、染色均匀、不收缩,与应用常规方法制作的石蜡切片相比质量明显提高,更易于教师教学和学生观察。
3、讨论
在医学院校,石蜡切片的质量直接影响着教师教学和学生学习的效果。我们在制作石蜡切片的过程中,主要从以下环节加强了质量控制。
3.1 固定
如果组织未得到及时固定或固定不够充分,超过6h组织就要自溶与腐败,制作的组织切片因自溶染色时较易脱片,镜下观察组织结构不清楚,呈现“发白”或“灰染”。我们在固定液的瓶底上放上药棉或几层纱布,使组织不直接与瓶底接触,此法能使固定液迅速而又均匀地从上、下、左、右、前、后各方渗入组织内,使组织固定的更均匀、快速、充分。新鲜柔软器官我们先固定,待基本硬化后再修剪成小块,然后再投入新配的固定液内,这样既能获得理想大小的标本,又能使组织在常规固定时间内完全固定。
3.2 脱水
脱水就是把固定好的组织块用乙醇脱尽其中的水分。乙醇脱水能力较强,常使组织过度收缩和变脆,为了克服这一缺点,除根据组织种类、组织块大小和固定剂的不同严格控制脱水时间外,我们采取从低浓度10%乙醇开始逐步升级,组织块中的水分逐渐被脱出,避免因脱水过度引起组织收缩、硬脆、切片时蜡带散裂、难以切出完整的切片。在脱水时用滤纸吸去组织块多余的水分,并用吹风机将其吹干,确保各级乙醇的浓度尤其是无水乙醇。根据硫酸铜遇水变蓝的原理,检测无水乙醇内是否有水并及时更换,确保组织脱水彻底,否则,放入透明剂时常出现白色混浊现象,包埋后的蜡块易出现凹陷和裂缝,组织较易与蜡块分离。
3.3透明
完全脱水的组织放入氯仿透明时,组织漂浮在氯仿的上面,我们用纱布包裹组织并在其上面压上载玻片,使组织完全浸入氯仿内,这样透明剂氯仿能均匀的渗入组织内。我们将氯仿和酒精按3∶1的比例组成混合透明剂,既能使组织进一步脱水而不引起收缩,又能使组织透明。
3.4浸蜡
由于蜡箱上部与底部温差是8℃左右,在蜡箱上部放1个温度计,只能显示蜡箱上部的确切温度。为避免温差对组织浸蜡带来不利,我们通常在蜡箱的中部与底部各放1个温度计显示各部的真实温度,把组织放在蜡箱相适宜的部位内浸蜡。较大的组织在软蜡和硬蜡内的时间要把握好,组织在浸软蜡时可以适当延长时间,在硬蜡内时间不可过长,因为硬蜡内的温度较高;浸蜡总体时间不可太长,否则会引起组织过度收缩,变硬、变脆、切片易碎裂、降低切片质量甚至失败;浸蜡时间也不可过短,否则蜡不能完全浸入组织中,切不出完整的切片。我们的经验是此过程应根据组织块大小、种类和结构的不同严格控制浸蜡温度及浸蜡时间。
综上所述,要提高每一张石蜡切片的质量,必须处理好每一个实验细节并能及时有效地解决实验出现的问题。希望我们改进后的组织学石蜡切片制作方法能够对从事科研、教学和临床诊断等工作有所帮助。
参考文献: [1]侯春春,徐水 .浅析影响石蜡切片质量的关键因素[J].中国农学通报,2009,25(23):94-98. [2]邹仲之,李继承.组织学与胚胎学[M].8版.北京:人民卫生出版社,2013:3-4. [3]江虹.制作石蜡切片的常见问题及处理[J].健康研究,2010,30(5):380-382. [4]武智明.病理组织制片及染色的几点体会[J].内蒙古医学杂志,2011,43(15):11. [5]扬捷频.常规石蜡切片方法的改良[J].生物学杂志,2006,23(1):45-46.
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